氨基柱那些事

整個(gè)色譜柱家族中，擁有許許多多的不同特色的柱子。不同性質(zhì)的色譜柱有著其*的作用方式。表一列出了日常工作中常規(guī)使用的幾類色譜柱的作用方式：

表一：不同填料色譜柱的作用方式

從上表可以看到，我們常使用的C8/C18僅能用于反相色譜，苯基與氟苯基也基本用于反相色譜；陰/陽(yáng)離子交換（SCX/SAX）顧名思義則用于離子交換色譜了；而相對(duì)更少用的CN（氰基）、NH2（氨基）、硅膠色譜柱則有多種作用方式，或者單*種方式或者混合模式。

上表中NH2（氨基柱）則比較搶眼，表現(xiàn)的像個(gè)選手。從反相到正相，包括時(shí)下熱門的HILIC，甚至于離子交換模式均可以產(chǎn)生。那么，這個(gè)選手（NH2）是否就可以替代其他色譜柱了呢？答案當(dāng)然是否定的。不僅僅在于其選擇性有很大的差異，更重要的，是氨基的色譜柱壽命普遍不長(zhǎng)。

如果說(shuō)C18是來(lái)自長(zhǎng)壽村的，那氨基柱一定來(lái)自非洲的津巴布韋。壽命的差異不是一星半點(diǎn)。不同品牌的氨基柱，必然也會(huì)有壽命上的差異，但是影響更多的，是使用條件。

我們所說(shuō)的氨基柱，通常是指硅膠基質(zhì)鍵合氨丙基，如圖一所示：

我們知道，脂肪鏈末端的氨基通常堿性較強(qiáng)，以正丙胺為例，可推測(cè)氨基柱末端的氨基pKa應(yīng)該也約為10：

我們還知道，作為硅膠基質(zhì)的色譜柱，常規(guī)使用pH范圍是2~8。過(guò)低的pH，鍵合相會(huì)斷裂，過(guò)高的pH，硅膠將溶解。該柱子固有的自身帶進(jìn)的氨基便是矛盾的存在，必然會(huì)影響壽命。此外，越短的鍵合相，壽命也可能越短。

在用于正相使用過(guò)程當(dāng)中，壽命會(huì)相對(duì)好上一些。當(dāng)用于RP/HILIC模式時(shí)，特別是添加有緩沖鹽的緩沖液時(shí)，甚至某些時(shí)候測(cè)酸性很強(qiáng)的樣品時(shí)，便會(huì)導(dǎo)致填料流失從而大大縮短色譜柱的使用壽命。

末端的氨基極易質(zhì)子化，成為-NH3+，在分析某些帶有電負(fù)性較強(qiáng)基團(tuán)的組分時(shí)，容易造成拖尾情況。微環(huán)境的離子強(qiáng)度可能也會(huì)影響色譜柱的壽命。

氨基柱是非常“復(fù)雜”和“脆弱”的色譜柱，這就要求我們必須更加細(xì)心的去維護(hù)。1、比如每次使用前先接上兩通，確保儀器系統(tǒng)中其他項(xiàng)目殘留的流動(dòng)相已被置換*；2、比如在用于反相模式時(shí)，在開始使用前先用含有一定比例水相的不含緩沖鹽的流動(dòng)相過(guò)渡，而不要直接上帶有鹽相，特別是較高鹽相的流動(dòng)相——這是因?yàn)橐话闱闆r下，色譜柱都保存在純乙腈/純正相溶劑（如是正相溶劑，過(guò)渡模式需要更換，這個(gè)找機(jī)會(huì)在講過(guò)）中，不過(guò)渡的情況下很可能發(fā)生鹽析而破壞柱子，導(dǎo)致柱子壽命縮短；3、比如使用中確保不要配錯(cuò)流動(dòng)相，防止溶劑走空等；4、再比如使用后確保清除*柱子中的緩沖鹽，并保存在純有機(jī)相中（ACN）中；5、后需要提到的一點(diǎn)是，盡管4中要求沖洗*，但是并不是代表可以一直沖洗一直沖洗，壽命跟流經(jīng)柱子的流動(dòng)相體積也在一定情況下成反比，我們必須找到一個(gè)經(jīng)綜合考慮后相對(duì)較優(yōu)的中間點(diǎn)，如果無(wú)法確認(rèn)是否沖洗干凈，我們一般認(rèn)為，10~20個(gè)柱體積基本上就能保證沖洗干凈。柱體積怎么算？小編之前的文章中肯定有提到，對(duì)于內(nèi)徑4.6mm的色譜柱，一個(gè)柱體積簡(jiǎn)易的計(jì)算方式是0.1*L（柱長(zhǎng)cm）。請(qǐng)記住沖洗的時(shí)間，定個(gè)鬧鐘，防止沖洗過(guò)渡而降低柱子的使用壽命。

該類柱子的使用帶來(lái)的另外一個(gè)問(wèn)題是，隨著使用時(shí)間的增加，鍵合相不可避免的流失，重現(xiàn)性便會(huì)有所變化，需要特別關(guān)注。

當(dāng)然，對(duì)于該類柱子，硅膠基質(zhì)有常規(guī)的，有雜化的，有封尾的有不封尾的，壽命當(dāng)然也會(huì)表現(xiàn)的不一樣。我們關(guān)心的選擇性和價(jià)格，必然也會(huì)有一些差異。至于選哪個(gè)，小編的回答就是萬(wàn)金油，適合的就是zui hao的。

關(guān)于該類色譜柱更加詳細(xì)的使用方式，還是請(qǐng)參考每根柱子自帶的說(shuō)明書，嚴(yán)格使用，便能保護(hù)好您的柱子。