2020版《中國(guó)藥典》四部液相色譜法修訂了，你知道嗎?

2020版藥典修訂工作正在如火如荼進(jìn)行中，那你知道液相色譜法新增和修訂了哪些內(nèi)容嗎？與2015版藥典有哪些不同嗎？在這里就把修訂的內(nèi)容進(jìn)行總結(jié)歸納。

一、檢測(cè)器新增了電霧檢測(cè)器

2020版藥典新增了電霧檢測(cè)器，大家對(duì)電霧檢測(cè)器了解嗎？

電霧式檢測(cè)器（CAD）是一種新型通用型液相色譜檢測(cè)器，具有較寬的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)范圍、較高的靈敏度和重復(fù)性、不依賴與化學(xué)結(jié)構(gòu)的信號(hào)響應(yīng)一致性、應(yīng)用廣泛和操作簡(jiǎn)捷等優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)用于中性、酸性、堿性及兩性物質(zhì)等，特別是無紫外吸收、非揮發(fā)性或半揮發(fā)性物質(zhì)的檢測(cè)。

與ELSD相比，CAD具有更高的檢測(cè)靈敏度、更好的日內(nèi)和日間重復(fù)性和更寬的線性范圍。很多ELSD無法檢測(cè)到的雜質(zhì)，在CAD上具有較好的響應(yīng)。與ELSD相比，難揮發(fā)性化合物的CAD響應(yīng)與分析物的理化性質(zhì)無關(guān)，在進(jìn)入CAD的流動(dòng)相組成不變的情況下，進(jìn)樣量相同的不同化合物具有相同的CAD響應(yīng)。換言之，CAD可用已知化合物的線性曲線定量未知化合物。此外，CAD做化合物純度分析所得數(shù)據(jù)更接近樣品的真實(shí)組成。

與UV相比，CAD的響應(yīng)不受化合物紫外吸收基團(tuán)的影響，半揮發(fā)和難揮發(fā)的化合物都能在CAD上具有較好的響應(yīng)，可以檢測(cè)UV無法檢測(cè)到的弱紫外吸收化合物。

圖1、電霧檢測(cè)器結(jié)構(gòu)及工作原理

電霧式檢測(cè)器有如下主要特點(diǎn)：

?基于該檢測(cè)器的設(shè)計(jì)原理與結(jié)構(gòu)，該檢測(cè)器總體上靈敏度高，如在分析葡萄糖、蔗糖和乳糖時(shí)，能檢測(cè)到0.5ng的柱上樣量；

?更高的響應(yīng)一致性，如對(duì)24種化合物在相同色譜條件下分別直接進(jìn)樣1μg（不接色譜柱），其響應(yīng)的峰面積的RSD值僅為10.7%；

?動(dòng)態(tài)檢測(cè)范圍寬，達(dá)3-4個(gè)數(shù)量級(jí)；

?應(yīng)用廣泛，能分析小分子、大分子化合物，如氨基酸、蛋白、聚合物等；

?使用操作直觀簡(jiǎn)單，維護(hù)十分簡(jiǎn)便，工作流速0.01-2.00 ml/min，兼容Micro-LC和UHPLC。

USP收錄的脫氧膽酸（USP40 NF35 S1）和EP收錄的釓布醇（Ph. Eur. 04/20/16:2735）兩個(gè)品種，含量測(cè)定和有關(guān)物質(zhì)測(cè)定均采用電霧檢測(cè)器。

二、對(duì)藥典方法品種正文項(xiàng)下規(guī)定的色譜參數(shù)調(diào)整做了詳細(xì)規(guī)定

應(yīng)評(píng)價(jià)色譜參數(shù)調(diào)整對(duì)分離和檢測(cè)的可能影響，必要時(shí)，調(diào)整的方法應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)的方法學(xué)驗(yàn)證。調(diào)整后，系統(tǒng)適用性應(yīng)符合要求，且色譜峰出峰順序不變。

??若減小進(jìn)樣體積，應(yīng)保證檢測(cè)限和峰面積的重復(fù)性；

??若增加進(jìn)樣體積，應(yīng)使分離度和線性關(guān)系仍滿足要求。

調(diào)整梯度洗脫色譜參數(shù)時(shí)應(yīng)比調(diào)整等度洗脫色譜參數(shù)時(shí)更加謹(jǐn)慎，因?yàn)榇苏{(diào)整可能會(huì)使某些峰位置變化，造成峰識(shí)別錯(cuò)誤，或者與其他峰合并。

三、新增了測(cè)定法項(xiàng)下定性分析項(xiàng)

明確規(guī)定了常用的定性方法主要有但不限于以下幾種：

1、利用保留時(shí)間定性

保留時(shí)間（retention time）tR被定義為被分離組分從進(jìn)樣到柱后出現(xiàn)該組份大響應(yīng)值時(shí)的時(shí)間，也即從進(jìn)樣到出現(xiàn)某組分色譜峰的頂點(diǎn)時(shí)為止所經(jīng)歷的時(shí)間，常以分（min）為時(shí)間單位，用于反映被分離的組分在性質(zhì)上的差異。通常以在相同的色譜條件下待測(cè)組分的保留時(shí)間與對(duì)照品的保留時(shí)間是否一致作為待測(cè)成分定性的依據(jù)。

在相同的色譜條件下，待測(cè)成分的保留時(shí)間與對(duì)照品的保留時(shí)間應(yīng)無顯著性差異；兩個(gè)保留時(shí)間不同的色譜峰歸屬于不同化合物，但兩個(gè)保留時(shí)間一致的色譜峰有時(shí)未必可歸屬為同一化合物，在作未知物鑒別時(shí)應(yīng)特別注意。

若改變流動(dòng)相組成或更換色譜柱的種類，待測(cè)成分的保留時(shí)間仍與對(duì)照品的保留時(shí)間一致，可進(jìn)一步證實(shí)待測(cè)成分與對(duì)照品為同一化合物。

當(dāng)待測(cè)成分（保留時(shí)間tR,1）無對(duì)照品時(shí)，可以樣品中的另一成分或在樣品中加入另一成分作為參比物（保留時(shí)間tR,2），采用相對(duì)保留時(shí)間（RRT）作為定性（或定位）、校正因子計(jì)算含量的方法。在品種項(xiàng)下，除另有規(guī)定外，相對(duì)保留時(shí)間以未扣除死時(shí)間的非調(diào)整保留時(shí)間按下式計(jì)算。

若需以扣除死時(shí)間的調(diào)整保留時(shí)間計(jì)算，應(yīng)在相應(yīng)的品種項(xiàng)下予以證明。

2、利用光譜相似度定性

化合物的全波長(zhǎng)掃描紫外-可見光區(qū)光譜圖提供一些有價(jià)值的定性信息。待測(cè)成分的光譜與對(duì)照品的光譜的相似度可用于輔助定性分析。

二極管陣列檢測(cè)器可得到更多的信息，包括色譜信號(hào)、時(shí)間、波長(zhǎng)的三維色譜光譜圖，既可用于輔助定性分析，還可用于峰純度分析。

3、利用質(zhì)譜檢測(cè)器定性

利用質(zhì)譜檢測(cè)器提供的色譜峰分子質(zhì)量和結(jié)構(gòu)的信息進(jìn)行定性分析，可獲得比僅利用保留時(shí)間或增加光譜相似性進(jìn)行定性分析更多的、更可靠信息，不僅可用于已知物的定性分析，還可提供未知化合物的結(jié)構(gòu)信息。