月旭層析填料選擇指南（一）

對(duì)于疫苗，相比大家都不陌生，歷*許多疑難雜癥終*解決都是憑借著接種疫苗，大家所熟知的天花也是如此。面對(duì)范圍愈演愈烈的新冠疫情，幾乎地球上的七十億人都在翹首期盼著疫苗的到來。

要生產(chǎn)疫苗，*的一步就是疫苗的純化。純化前首先需要測定生物分子的各物理和化學(xué)特性，然后通過實(shí)驗(yàn)選擇出zui有效的純化流程。

月旭科技作為分析科學(xué)技術(shù)解決方案供應(yīng)商，能夠提供各種蛋白純化填料，滿足疫苗、重組蛋白、單抗、抗體及抗原、肽類、病毒、生化分子等分離純化。

各位小伙伴也許對(duì)如何選擇合適的蛋白純化填料總是一頭霧水，在這里就根據(jù)小伙伴們的樣品，來給各位做一個(gè)介紹。

1 《疫苗純化――病毒類疫苗純化》

凝膠過濾介質(zhì)Tanrose 4Fast Flow 或Tanrose 6Fast Flow是經(jīng)典的病毒類疫苗純化方法，可以去除培養(yǎng)基中的雜蛋白、處理量大、快速的特點(diǎn)。柱高一般40-70cm，上樣量一般為10-15%。目前使用此方法生產(chǎn)的疫苗品種有：乙肝、狂犬、出血熱、流感等。

2 《純化――單抗、抗原》

單抗多為IgG。來源主要是腹水和融合瘤培養(yǎng)上清液。腹水有大量白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白和宿主抗體等。Protein G和Protein A對(duì)IgG的Fc區(qū)有專一性親和作用，能一步純化各種不同來源的IgG。重組Protein A對(duì)IgG有較高的載量和專一性，基團(tuán)脫落更少。脫落的rProtein A 用離子交換Q Tanrose HP凝膠即可很容易去除。

血清互補(bǔ)劑如小牛血清可先用Protein G預(yù)處理，在培養(yǎng)前除去IgG。

疏水層析苯基-瓊脂糖凝膠HP亦很適合純化IgG。可有效去除抗體中的聚集體。

純化IgG 抗原zui有效的方法是用活化偶聯(lián)介質(zhì)如CNBr、NHS activated 瓊脂糖凝膠偶聯(lián)IgG,再進(jìn)一步獲取IgG 抗原。

3《純化――重組蛋白》

重組蛋白在設(shè)計(jì)和構(gòu)建的時(shí)候應(yīng)該已經(jīng)考慮到了純化的問題。在此，我們提供二個(gè)快速表達(dá)、一步純化的融合系統(tǒng)。

一、HiS標(biāo)簽重組蛋白可以很方便用鎳IDA瓊脂糖凝膠FF（Ni Tanrose 6FF IDA）或鎳NTA瓊脂糖凝膠FF（Ni Tanrose 6FF NTA）分離，填料已經(jīng)螯合好了鎳離子，使用非常方便，有更高的吸附載量，特異性更強(qiáng)，可以選擇多種洗脫方式，是純化這類融合蛋白的*工具，也可以選擇HP級(jí)別高分辨率的填料。

二、GST融合蛋白在表達(dá)時(shí)同時(shí)表達(dá)了谷胱甘肽s轉(zhuǎn)酶，很方便用GST瓊脂糖凝膠FF（GST Tanrose 4FF）分離，然后再用腸激酶或凝血酶等酶解就得到表達(dá)的產(chǎn)物。凝血酶可以用肝素瓊脂糖凝膠FF（Heparin Tanrose 6FF）或苯甲脒瓊脂糖凝膠FF（Benzamidine Tanrose 4FF）分離。

4《純化――血漿蛋白》

陰離子交換在血漿蛋白的純化中應(yīng)用非常廣泛，結(jié)合低溫乙醇法在丙種球蛋白純化后期用DEAE-瓊脂糖凝膠FF（DEAE Tanrose  6FF）吸附二聚體等雜質(zhì)從而達(dá)到提高產(chǎn)品純度的目的，同樣也可以在白蛋白純化過程中使用陰離子交換吸附PKA、微量的IgG以及聚體，在凝血VIII因子純化過程中使用大孔徑的Q瓊脂糖凝膠（Solid Q）可以增加載量和回收率。