SN/T 2229-2008 茶葉中稻瘟靈測定操作要點及優化

稱取試樣5g，加入5g無水硫酸鈉和20mL乙腈，渦旋混勻2min。超聲提取10min，8000 rpm離心5min，將上清液通過通過裝有無水硫酸鈉的濾紙過濾脫水于100mL濃縮瓶中。再用20mL乙腈重復提取一次，合并提取液于100mL濃縮瓶中，在旋轉蒸發器上45℃濃縮至干，加入6mL正己烷溶解殘渣待凈化。

試樣稱取2g，加入4mL飽和氯化鈉溶液，渦旋混勻0.5min。放置0.5h，加入20mL乙腈，用均質器以10000r/min均質2min，4000rpm離心5min，將上清液轉移至100mL濃縮瓶中。再用20mL乙腈重復提取一次，合并提取液于100mL濃縮瓶中，在旋轉蒸發器上55℃濃縮約5mL，濃縮提取液轉移至250mL分液漏斗中，加入100mL硫酸鈉溶液和40mL正己烷，振搖2min，靜置分層，將上清液通過將上清液通過裝有無水硫酸鈉的濾紙過濾脫水于200mL濃縮瓶中。再用40mL正己烷重復提取一次，合并提取液于200mL濃縮瓶中，45℃旋轉濃縮至干，加入5mL正己烷溶解殘渣待凈化。

在實際茶葉樣品的操作中，標準中采用了乙腈提取，再將提取液轉移至分液漏斗中，加入硫酸鈉溶液和正己烷進行液液萃取，溶劑置換為正己烷后進行旋蒸濃縮，然后再進行過柱凈化，但我們按標準的操作步驟實際進行操作發現，回收率只有60%，我們進行了減少稱樣量、增加正己烷體積等操作，發現均不能得到很好的實驗結果。因此我們采用去掉正己烷萃取這一操作，只用乙腈進行提取，同時將無水硫酸鈉代替飽和氯化鈉溶液，以達到更好的除水效果，按此方案得到的回收率為103%。

標準中采用石墨炭黑柱與弗羅里硅土柱串聯凈化后，再用HLB固相萃取柱進行凈化，具體操作如下：

SPE柱：石墨炭黑柱，1000mg/6mL；弗羅里硅土柱，1000mg/6mL。

活化：3mL丙酮、5mL正己烷；

上樣：待凈化液全部上樣，棄去流出液；

洗脫：石墨炭黑柱與弗羅里硅土柱串聯后，加入10mL正己烷-丙酮（8:2）洗脫，收集流出液，洗脫液經60℃氮吹儀吹干，用6mL 30%甲醇溶液溶解殘渣轉移到HLB固相萃取柱中；

活化：3mL甲醇、3mL水；

上樣：待凈化液全部上樣，棄去流出液；

洗脫：加入14mL 80%甲醇溶液洗脫，收集流出液。

洗脫液經60℃氮吹至約3mL后，加入5mL正己烷和5mL硫酸鈉水溶液，渦旋混勻，3000r/min離心3min，取上清液上機測定。

但在實際進行操作中，我們采用Carb、Florisil PR、BRP固相萃取柱進行凈化操作時，發現回收率只有70%左右，而去掉BRP固相萃取柱后，回收率為105%，且上機測定發現用Carb、Florisil PR柱已經可以達到凈化效果，因此在我們的實驗方案中去掉了BRP固相萃取柱。

SPE柱：Welchrom^® Carb，規格：1000mg/6mL；Welchrom^® Florisil PR，規格：1000mg/6mL。

活化：3mL丙酮，5mL正己烷，棄去；

上樣：待凈化液全部上樣，控制流速在1mL/min~2mL/min，棄去流出液；

洗脫：石墨炭黑柱柱與弗羅里硅土柱串接，加入10mL正己烷-丙酮（8:2）溶液洗脫，控制流速在1mL/min~2mL/min，收集流出液于15mL離心管中；

復溶：60℃氮吹至干，準確加入1mL正己烷溶解殘渣，過0.22μm有機系濾膜后上GC檢測。

色譜柱：WM-1701，30m×0.32mm×0.25μm。

升溫程序：150℃（4min），30℃/min上升至260℃（5min），20℃/min升至270℃（10min）；

進樣口：260℃，分流進樣，分流比：20:1；

檢測器：350℃；

進樣量：1μL；

載氣流量：1.0mL/min。