親和色譜分離技術

親和色譜分離技術是專門用于純化生物大分子的色譜分離技術，它是基于固定相的配基與生物分子間的特殊生物親和能力來進行互相分離的。

親和色譜廣泛用于酶、抗體、核酸、激素等生物大分子，以及細胞、細胞器、病毒等物質的分離與純化。特別是對分離含量極少而又不穩定的活性物質*，經一步親和色譜即可提純幾百至幾千倍。例如，從肝細胞抽提液中分離胰島素受體時，以胰島素為配基，偶聯于瓊脂載體上，采用親和色譜可提純8000倍。親和色譜經過幾十年的發展，隨著新型介質的應用和各種配體的出現，其應用日益廣泛。

親和色譜的吸附作用主要是靠生物分子對它的互補結合體（配基）的生物識別能力，如酶與底物、抗原與抗體、激素與受體、核酸中的互補鏈、多糖與蛋白復合體等。親和色譜是應用生物高分子物質能與相應專一配基分子可逆結合的原理，將配基通過共價鍵牢固地結合于固相載體上，制得親和吸附系統。生物分子上具有特定構象的結構域與配體的相應區域結合，具有高度的特異性和親和性。其結合方式為立體構象結合，具有空間位阻效應。結合的作用力包括靜電作用、疏水作用、范德瓦耳斯力以及氫鍵等。

例如，酶和底物的專一結合，被假設為是一種“多點結合"，底物分子中至少有3個官能團應與酶分子的各個對應官能團結合，而且這種結合必須持有特定的空間構型。也就是說，底物分子中的一些官能團必須同時保持著與酶分子中相應官能團起反應的構型。如果某個有關基團的位置發生改變，就不可能再有結合反應出現。

將具有特異親和力的一對分子的任何一方作為配基，在不傷害其生物功能的情況下，與不溶性載體結合，使之固定化，裝入色譜柱中，然后將含有目的物質的混合液作為流動相，在有利于固定相配基與目的物質形成配合物的條件下進入色譜柱。這時，混合液中只有能與配基發生配位反應形成配合物的目的物質被吸附，不能發生配位反應的雜質分子直接流出。經清洗后，選擇適當的洗脫液或改變洗脫條件進行洗脫，使被分離物質與固定相配基解離，即可將目的產物分離純化。

親和色譜分離的基本過程如下：

把具有親和力的一對分子的任何一方作為配基，在不傷害其生物功能的情況下，與不溶性載體結合，使之固化，裝入色譜柱，然后把含有目的物質的混合液作為流動相，在有利于固定相配基和目的物形成配合物的條件下進入色譜柱。這時，混合液中只有能與配基發生結合反應形成配合物的目的物質被吸附，不能發生結合反應的雜質分子則直接流出。變換通過色譜柱的溶液組成，促使配基與其親和物解離，即可獲得純化的目的產物。

親和色譜分離技術由于其具有簡便、快速、專一和高效等特點，已普及到生命科學各個領域，在生物制品分離和分析領域有廣泛的應用開發前景。親和色譜主要用來純化生物大分子，適用于從組織或發酵液中，分離雜質與純化目的物間溶解度、分子大小、電荷分布等物化性質差異較小，而相對含量低、其他經典手段分離有困難的高分子物質。尤其是對分離某些不穩定的高分子物質更具*性。

1）分離和純化各種生物分子

親和色譜可以用來分離與純化干擾素、酶、rDNA、抗原、抗體、絨毛生長激素等各種生物分子。例如，用親和色譜純化干擾素，可以一步把人體纖維母細胞干擾素純化數千倍，分離效guo顯著。

2）分離純化各種功能細胞、細胞器、膜片段和病毒顆粒

親和色譜為分離和純化不同功能的細胞提供了可能性。

3）用于各種生物物質的分析檢測

親和色譜技術在生物物質的分析檢測上也已廣泛應用。例如，利用親和色譜可以檢測羊抗DNP（二硝基苯）抗體。