親和層析中的蛋白洗脫

親和層析是根據(jù)一種生物分子間的特異相互作用來(lái)分離物質(zhì)的層析方法，利用待分離物質(zhì)與配體間所具有的特異性親和力來(lái)達(dá)到分離目的的一類(lèi)特殊層析技術(shù)。如抗原與抗體、DNA與RNA、酶與底物或抑制物等。

從親和層析填料上洗脫結(jié)合靶標(biāo)是結(jié)合的可逆過(guò)程，需優(yōu)化條件，削弱靶標(biāo)和配基之間的相互作用。洗脫條件不應(yīng)使靶蛋白變性，除非這些條件與下游程序兼容。

有兩種類(lèi)型的洗脫方法，即特異性洗脫和非特異性洗脫。

特異性洗脫過(guò)程中，介質(zhì)或競(jìng)爭(zhēng)配基或競(jìng)爭(zhēng)靶標(biāo)，通過(guò)這種形式攻擊蛋白質(zhì)-配基復(fù)合物，繼而將靶蛋白釋放至溶液中。用于洗脫的競(jìng)爭(zhēng)介質(zhì)的濃度和量（體積）依賴(lài)于其親和力，這種親和力與固定復(fù)合物的親和力相關(guān)。與親和力強(qiáng)的添加物相比，競(jìng)爭(zhēng)介質(zhì)的結(jié)合越弱越需要更高的濃度和更大的體積。對(duì)于弱的競(jìng)爭(zhēng)介質(zhì)，比配基高10倍是較好的濃度起點(diǎn)。特異性洗脫通常是溫和的，更可能保留蛋白質(zhì)的活性。這種方法的缺點(diǎn)在于：洗脫慢、洗脫峰寬、需要從回收的蛋白質(zhì)中去除競(jìng)爭(zhēng)介質(zhì)。

對(duì)于非特異性洗脫，需根據(jù)配基與蛋白質(zhì)之間的相互作用機(jī)制優(yōu)化洗脫條件，如增加鹽濃度、降低離子相互作用或通過(guò)改變pH來(lái)改變質(zhì)子化/離子化狀態(tài)，從而調(diào)節(jié)氫鍵強(qiáng)度、疏水相互作用及靜電相互作用。從固定的Protein G上洗脫抗體就是一個(gè)改變pH的例子，然而Protein G與抗體的親和力非常強(qiáng)，需要不同洗脫條件組合達(dá)到zui大程度的抗體釋放。通常，親和作用需要靶蛋白正確地三維折疊，因此離液劑或影響蛋白質(zhì)折疊的試劑可用于洗脫目標(biāo)蛋白質(zhì)，但是，必須注意保證靶標(biāo)的正確折疊在洗脫后迅速恢復(fù)天然條件。當(dāng)親和力弱時(shí)，高濃度靶分子結(jié)合后，通過(guò)稀釋以解離、洗脫復(fù)合物。

月旭科技可提供的親和層析填料

? Protein G Tanrose 4FF抗體親和介質(zhì)

? Ni Tanrose 6FF（NTA/IDA）/Ni Tanrose 6HP（NTA）/Ni Tanrose 4FF（NTA/IDA）金屬螯合親和介質(zhì)

? Co Tanrose 6FF（NTA）金屬螯合親和介質(zhì)

? IMAC Tanrose 6FF/Chelating Tanrose 6FF金屬螯合親和介質(zhì)

? Benzamidine Tanrose 4FF苯甲脒親和介質(zhì)

? GST Tanrose 4FF谷胱甘肽親和介質(zhì)

? Heparin Tanrose 6FF/Heparin Tanrose 6HP肝素親和介質(zhì)

? Endotoxin rem Tanrose 4FF內(nèi)毒素親和填料

? NHS-activiated Tanrose 4FF/CNBr-activiated Tanrose 4FF預(yù)活化親和填料

月旭科技可提供預(yù)裝柱供您選擇