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    反相離子對色譜法建立的注意事項(二)

    更新時間:2022-04-20 點擊次數:1383

    今天小編再給大家分享一些注意事項:



    方法調整

    有機相,pH值,進樣量,柱溫等。


    有機相

    微信截圖_20220420102127.png


    案例

    色譜條件

    色譜柱:月旭Ultimate® XB C18(4.6×250,5μm)。

    流動相:A相:磷酸鹽緩沖液(磷酸二氫鉀6.8g/L,磷酸調整pH=2.5);  

    B相:甲醇/乙腈/四氫呋喃;

    檢測器:280nm;

    柱溫:30℃;

    流速:1.0ml/min;

    進樣量:10μL;

    樣品溶劑:A相;

    樣品溶液:L-去甲腎上腺素、腎上腺素、L-酪氨酸、多巴胺用溶劑配置成濃度均為:0.2mg/mL。


    B相:6%乙腈


    微信截圖_20220420102138.png

    B相:10%甲醇

    微信截圖_20220420102246.png

    B相:2.5%四氫呋喃


    微信截圖_20220420102340.png

    討論:在使用相似洗脫能力的有機相比例的情況下,同時檢測L-去甲腎上腺素、腎上腺素、L-酪氨酸、多巴胺4種物質,常用的甲醇,乙腈,四氫呋喃三種有機溶劑具有不同的分離結果,可以根據表《溶劑的選擇性特征》進行篩選。


    pH值


    微信截圖_20220420102415.png

    討論:針對于易解離的物質,不同的pH會導致物質的解離程度不一樣,進而引起保留時間的差異,反相離子對色譜法中需要物質成為統一的解離狀態(tài)。

    微信截圖_20220420102454.png


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