如何建立穩健的雜質控制分析方法

穩健的分析方法意味著其可以忽略工作和環境條件改變對方法的影響。穩健性好的雜質分析方法可以在不同實驗室間順利轉移，分析結果可以不受操作中的微小變化的影響，且對技術、設備等條件的變化有緩解作用。對于HPLC分析方法，影響方法轉移的最關鍵因素為色譜柱和色譜儀。

反相高效液相色譜法（RP-HPLC）廣泛應用于藥品質量的控制，包括鑒別、含量測定、有關物質檢查等。反相色譜法主要采用C18柱，各國藥典包括《中國藥典》、《美國藥典》（USP）、《歐洲藥典》（EP）等在液相方法的描述中，通常僅給出色譜柱的簡單信息，如《中國藥典》中的“用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑”，USP中的“L1填料（octadecylsilanebonded silica gel）”，EP中有時還給出色譜柱孔徑（pore size），顆粒大小（particle size），比表面積（specific surface area）等信息，但均未對C18色譜柱的具體品牌，型號等進行規定和推薦。目前藥典中給出的色譜柱信息對選擇合適的色譜柱分析樣品沒有太多幫助。

市場上有600多種不同品牌的C18色譜柱，且不斷有新品牌的色譜柱出現。采用不同品牌，不同型號的色譜柱分析具體樣品時，由于色譜柱選擇性的差異，溶質的保留值，色譜峰之間的分離度甚至色譜峰順序都可能出現較大的差異。另外，在重復某一HPLC方法時，當無法獲得方法中所用色譜柱時，需要尋求選擇性相似的色譜柱代替。因此采用適宜的方法表征色譜柱的特性是建立穩健的藥品標準雜質控制分析方法和應用該分析方法的關鍵。

月旭Ultimate^® 系列液相色譜柱對某藥物的系統適用性溶液分析譜圖

依據藥物降解反應機理制備混合雜質對照品用于系統適用性試驗，可以有效評價色譜體系對各雜質的分離效能，且利用混合對照品中各雜質的色譜保留信息和UV光譜信息，可準確定位樣品中的主要雜質。利用混合雜質對照品得到的系統適用性試驗色譜圖，可以方便地確定不同實驗室得到的色譜圖是否具有可比性，并能同時確認方法的精密度、定量限（LOQ）和／或檢測限（LOD）。

月旭Xtimate^® 系列液相色譜柱對某藥物的有關物質分析譜圖

藥物雜質HPLC分析方法常采用梯度洗脫系統。對于不同品牌的HPLC儀器，因實現梯度洗脫的裝置或原理不同，比例閥與色譜柱進口間的體積不同，會引起梯度滯后的時間不同，造成儀器間梯度行為有差異。采用動態法表示梯度程序［即以與系統滯后時間（t_D）的差異建立梯度表］，可以有效消除管路及儀器裝置差異對梯度的影響，使梯度方法有良好的分離重現性。