提效減耗！HPLC方法如何轉(zhuǎn)換為UHPLC方法？

● 相同的選擇性：選擇相同品牌，相同鍵合工藝制成的填料僅僅是粒徑不一致。

● 相同或者更大的柱長粒徑比：這是保證具有相當(dāng)或者更高的理論塔板數(shù)。

2. 樣品濃度不改變，進(jìn)樣體積與柱體積成正比

例如：

HPLC柱：4.6*150mm，5μm 進(jìn)樣體積：20μL

UHPLC柱：2.1*100mm，進(jìn)樣體積則為：

3. 梯度洗脫程序的轉(zhuǎn)換

等度方法只需要調(diào)整流速和進(jìn)樣量，如果是梯度洗脫則需調(diào)整梯度洗脫程序。調(diào)整的依據(jù)，需計(jì)算在幾何縮放的流速下輸送相同倍數(shù)柱體積溶劑到目標(biāo)柱需要的時(shí)間。

同時(shí)，由于不同儀器之間系統(tǒng)體積存在差異，也需要在轉(zhuǎn)換時(shí)加以考慮。梯度程序轉(zhuǎn)換的計(jì)算過程這里不做詳細(xì)描述。通常色譜儀器均配備轉(zhuǎn)換軟件，輸入原始洗脫程序，軟件可自動(dòng)計(jì)算并轉(zhuǎn)換為目標(biāo)儀器的洗脫，然后根據(jù)色譜峰分離情況進(jìn)行人工微調(diào)。

1. 改善分離度：調(diào)整梯度洗脫程序，增加長度是便捷可行的措施；

2. 如果破壞試驗(yàn)檢測(cè)的雜質(zhì)情況不一致，轉(zhuǎn)換后的雜質(zhì)多且物料平衡優(yōu)于前者，兩者測(cè)定結(jié)果沒有明顯區(qū)別，轉(zhuǎn)換成功；

3. 如果結(jié)果明顯不一致，或涉及不合格情況，應(yīng)匯報(bào)相關(guān)負(fù)責(zé)人，是否需要對(duì)原方法進(jìn)行再評(píng)估或放棄方法轉(zhuǎn)換。

1. 原則：系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)不符合要求；

2. 分離度調(diào)整后達(dá)不到要求；

3. 破壞性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)出來物料平衡明顯不如HPLC法，方法優(yōu)化后不能解決；

4. 檢測(cè)結(jié)果與HPLC不一致，甚至出現(xiàn)不合格，那需要對(duì)原方法進(jìn)行評(píng)估或者放棄方法轉(zhuǎn)換。

1. 原則：系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)符合要求；

2. 峰純度達(dá)到要求；

3. 分離度達(dá)到要求；

4. 靈敏度達(dá)到要求；

5. 沒有系統(tǒng)適用性要求的項(xiàng)目進(jìn)行樣品2-3種條件的破壞性實(shí)驗(yàn)，雜質(zhì)分離和物料平衡均要相當(dāng)。