溶劑系統對RP-HPLC分離性能的影響

流動相A ：0.1%磷酸 B：ACN，A：B=3：7，

色譜柱 ：UItimate^® ODS-3 4.6mm×150mm，5μm。

由圖譜判斷8.6min峰內夾雜小峰未分開，UItimate^® ODS-3 4.6mm×150mm，5μm更適合分離。

考慮不同溶劑洗脫強度不同，有機相中加入甲醇，流動相A ：0.1%磷酸 B：ACN：甲醇=8：2，A：B=3：7。

從圖譜中可以看出加入甲醇后峰明顯分離。

調整有機溶劑比例，流動相A ：0.1%磷酸 B：ACN：甲醇=7：3，A：B=3：7。

調整有機溶劑比例后可以得出10.7min和11.9min分離度增加到3.0。

優化方法，流動相A ：0.1%磷酸 B：ACN：甲醇=7：3，A：B=4：6。

從圖譜中可以看出將峰分開，分離度增大，適當的調整有機相種類及比例可以提高分離性能。