我拿什么分析你，大分子樣品！

分子的體積排阻，樣品組分和固定相之間原則上不存在相互作用，色譜柱的固定相是具有不同孔徑的多孔凝膠，在固定相確定的分子量范圍內，洗脫順序按照分子大小分布。當樣品分子量較大，以至于被wan全排除在固定相微孔之外時（全排阻），其保留體積等于色譜柱內微粒間的空隙體積；而分子量足夠小的分子可以wan全進入微孔中，其保留體積為空隙體積和固定相中微孔體積之和，因此小的溶質分子保留時間長，洗脫體積大，而大的溶質分子保留時間短，洗脫體積小。固定相的分子量測定范圍即為全滲透和全排阻之間的分子量范圍。

理想的體積排阻色譜固定相應具有窄的孔徑分布范圍，而系列色譜固定相應具有寬范圍的孔徑分布，可根據樣品的不同選擇不同分子量范圍的SEC柱，也可將不同規格的SEC柱串聯使用，用于分離更大分子量范圍的樣品。

一般用于分離水溶性的大分子，凝膠的代表是葡聚糖系列，洗脫溶劑主要是水。

主要用于有機溶劑中可溶的高聚物相對分子質量分布分析及分離，常用的凝膠為交聯聚苯乙烯凝膠，洗脫溶劑為四氫呋喃等有機溶劑。

兩種方法的分離原理雖然相同但采用的固定相、分離對象和使用技術wan全不同。

體積排阻色譜法中，實際的分離效果與樣品、流動相之間的相互作用無關，因此改變流動相的組成一般不會改變分離度。當采用示差折光檢測器時，為提高檢測靈敏度，應使流動相的折射率與被測樣品的折射率有盡可能大的差別。若使用紫外吸收檢測器，也應采用在檢測波長無紫外吸收的溶劑。

體積排阻色譜法中流動相的選擇原則：

凝膠滲透色譜主要用于高聚物分子量的測定。四氫呋喃對此類樣品有良好的溶解性能，可使小孔徑聚苯乙烯凝膠溶脹，因此被廣泛使用作為GPC流動相。但因其在儲運過程中特別是在光照射條件下，容易生成過氧化物，使用前必須除去。二甲基甲酰胺、鄰二氯苯、間甲酚等溶劑可在高柱溫條件下使用；強極性的六氟異丙醇、三氟乙醇等可用于粒度小于10μm的凝膠柱。

在凝膠過濾色譜中，通常以具有不同pH值的緩沖溶液作為流動相。當采用親水性有機凝膠（葡聚糖、瓊脂糖、聚丙烯酰胺等）、硅膠或改性硅膠為固定相時，固定相與樣品間可能存在多種相互作用影響GFC測定準確性，可在流動相中添加少量無機鹽以保持一定的離子強度（0.1~0.5mol/L），其中鈉、鉀、銨等的硫酸鹽、磷酸鹽消除吸附作用的效果較好。當使用硅膠基質凝膠時，流動相的pH值應保持在4~8的范圍，以免硅膠鍵合相被破壞。

該沖洗的清洗溶液選擇的基本原則：