等度洗脫VS梯度洗脫，如何選擇？

哈嘍，有液相實驗經驗的小伙伴應該都清楚，在考察液相色譜分離條件時，最重要的參數就是洗脫條件。其中洗脫條件又分為等度洗脫和梯度洗脫。下面小編就簡單帶大家來看下這兩種洗脫方式的優點和缺點，以及他們的適用范圍。

01、等度洗脫

是指在樣品組分的分析周期中，流動相的組成比例和流速恒定不變的洗脫方式。

優點

1、對于等度洗脫而言，由于方法運行時，流動相的比例不發生變化，所以它對儀器的要求不高，只需要一個單元泵就可以運行方法。

2、由于等度洗脫條件單一，所以比較容易用來摸索方法設置，例如改變流動相比例，改變柱溫等條件。

3、由于等度洗脫每次運行時的流動相比例相同，所以相同方法運行多個樣品時，樣品之間不需要設置平衡時間來讓系統恢復到所需的流動相比例。

缺點

1、越往后出峰的組分色譜峰越寬。

2、并且大多數等度洗脫的方法分析時間較長。

02、梯度洗脫

是指在同一個分析周期中，按一定程序不斷改變流動相的濃度配比的洗脫方式。

優點

1、梯度洗脫能夠規避掉等度洗脫的問題，例如梯度洗脫的樣品峰，無論先出峰還是后出峰的組分，它們的峰形基本都能保證尖銳對稱。

2、由于梯度洗脫通常設置的流動相比例是讓洗脫強度越來越強，這樣能保證在較短的時間內，讓樣品中強保留組分也能被洗脫出來。

缺點

1、如果在運用梯度洗脫時，流動相比例變化過快，可能產生鬼峰影響檢測。

2、梯度洗脫對儀器的配置要求較高，通常需要配置四元泵或者二元泵。

3、梯度洗脫每次運行樣品之間，需要設置一定的平衡時間，來讓系統中流動相的比例到達初始流動相比例。

4、梯度洗脫的方法設置復雜，例如影響分離的：有初始流動相比例、流動相的梯度變化、結束流動相比例、柱溫箱溫度等，所以方法的開發和優化會較為復雜。

03、適用范圍

用梯度洗脫還是等度洗脫，主要看雜質與雜質、主峰、溶劑峰的分離的情況。同一物質有梯度洗脫和等度洗脫兩種條件時，梯度洗脫的認可度較高。下面就是更適合梯度洗脫的適用情況。

1、多組分樣品的極性范圍大，用等度無法全部洗脫的樣品。

第一種情況：雜質和主成分極性相差很大，長時間雜質未能洗脫出來，就必須考慮用梯度。

第二種情況：雜質極性比主峰的大，等度時要想主峰時間合適雜質全堆在前邊，雜質分開主峰又出峰太晚，這種情況也得考慮梯度洗脫。

2、大分子量樣品（肽、蛋白質、合成聚合物等）一般采用梯度洗脫分離會更好，尤其是反相條件。這類樣品，往往對有機相的量特別敏感，有機相的微小變化就會使樣品的保留時間發生很大的變化，導致用等度條件檢測時，無法使保留時間控制在一個穩定合適的范圍內。

3、改善峰型。

4、目標峰出峰后，短時間內提高有機相比例，洗脫強保留干擾雜質。

5、用等度洗脫無法達到分離的情況。有些物質，特別是結構相近的物質，等度條件下無法達到分離，而采用梯度模式，因組分在有機相變化的選擇性差異，可以達到分離，這種情況下就需要采用梯度條件進行測試。